色譜法的分離原理是：溶于流動(dòng)相( phase)中的各組分經(jīng)過(guò)固定相時(shí)，由于與固定相(stationary phase)發(fā)生作用（吸附、分配、離子吸引、排阻、親和）的大小、強(qiáng)弱不同，在固定相中滯留時(shí)間不同，從而先后從固定相中流出。又稱(chēng)為色層法、層析法。
液相色譜法的特點(diǎn)和優(yōu)點(diǎn)
HPLC有以下特點(diǎn)：
高壓——壓力可達(dá)150~300 Kg/cm2。色譜柱每米降壓為75 Kg/cm2以上。
高速——流速為0.1~10.0 ml/min。
——可達(dá)5000塔板每米。在一根柱中同時(shí)分離成份可達(dá)100種。
高靈敏度——紫外檢測(cè)器靈敏度可達(dá)0.01ng。同時(shí)消耗樣品少。
HPLC與經(jīng)典液相色譜相比有以下優(yōu)點(diǎn)：
速度快——通常分析一個(gè)樣品在15~30 min，有些樣品甚至在5 min內(nèi)即可完成。
分辨率高——可選擇固定相和流動(dòng)相以達(dá)到*分離效果。
靈敏度高——紫外檢測(cè)器可達(dá)0.01ng，熒光和電化學(xué)檢測(cè)器可達(dá)0.1pg。
柱子可反復(fù)使用——用一根色譜柱可分離不同的化合物。
樣品量少，容易回收——樣品經(jīng)過(guò)色譜柱后不被破壞，可以收集單一組分或做制備。
液相色譜法對(duì)流動(dòng)相的基本要求是：
①與固定相不互溶，不發(fā)生化學(xué)反應(yīng)。
②對(duì)樣品有適宜的溶解度，要求k值在1～10范圍內(nèi)（可用范圍）或2～5（*范圍）。溶解度太大，k值太小，不利于分離；溶解度太小，k值太大，可能使樣品在流動(dòng)相中產(chǎn)生沉淀。
③必須與檢測(cè)器相適應(yīng)。例如用紫外檢測(cè)器，流動(dòng)相本身在檢測(cè)波長(zhǎng)處應(yīng)無(wú)吸收。
④流動(dòng)相的粘度要小，可以降低色譜柱的阻力而提高柱效。
⑤純度高，不含機(jī)械雜質(zhì)。
在HPLC中影響因素很多，流動(dòng)相只是其中一個(gè)很重要的部分，要運(yùn)用好液相色譜法還需考慮其他各個(gè)方面的因素。
|
|
|
|
|
 |
會(huì)員_a.png)